LIPIDA HASIL PERIKANAN LAUT

 Kadar Dan Komponen Lemak Hasil Laut

Pada beberapa jenis ikan tempat penumpukan lemak yang utama adalah di hati, sedangkan pada jenis lainnya tempat penumpukkan lemak berada didalam daging. Asam-asam lemak alami yang termasuk asam lemak omega-3 adalah linoleat (C18;, n-3), asam eikosapentaenoat atau EPA (C20:5, n-3) dan asam dekosaheksaenoat atau DHA (C22:6, n-3). Adapun yang lebih dominan pada lemak ikan adalah EPA dan DHA.

Menurut Sukarsa (2004), Ikan tongkol mengandung DHA sebesar 23,47% dan EPA sebesar 6,03%, ikan kakap mengandung DHA sebesar 20,57% dan EPA sebesar 4,5 %, ikan selar mengandung DHA sebesar 21,56% dan EPA sebesar 7,3%, ikan tembang mengandung DHA sebesar 15,69% dan EPA sebesar 4,33%, sedangkan ikan kakap merah mengandung DHA sebesar 17,05% dan EPA tidak terindentifikasi.

Sedangkan kadar lemak pada ikan layur, ikan tenggiri dan ikan tongkol menurut Pratama et al., (2011) adalah sebagai berikut :

 Urutan Polaritas Pelarut Lemak

Menurut Sholeh (2009), jenis pelarut polaritas berdasarkan indeks polaritasnya adalah sebagai berikut :

Pelarut	Indeks polaritas
Pentana	0
1,1,2 - triklorotrifluoroetana	0
Siklopentana	0.1
Heptana	0.1
Heksana	0.1
Iso oktana	0.1
Petroleum eter	0.1
Siklo heksana	0.2
N- butilkloria	1.0
Toluena	2.4
Metal t-butil eter	2.5
o- xylene	2.5
Klorobenzena	2.7
O – diklorobenzena	2.7
Etil eter	2.8
Diklorometana	3.1
Etilen diklorida	3.5
N – butil alkohol	3.9
Isopropil alkohol	3.9
N – butil asetat	4.0
Isobutyl alkohol	4.0
Metal isoamil keton	4.0
N – propoil alkohol	4.0
Tetra hidrofuran	4.0
Kloroform	4.1
Metal isobutyl keton	4.2
Etil asetat	4.4
Metal n-propil ketone	4.5
Metal etil ketone	4.7
1,4 – dioxana	4.8
Aseton	5.1
Methanol	5.1
Piridin	5.3
2 -  metoksietanol	5.5
Asetonitrit	5.8
Propilen karbonat	6.1
N – n dimetilformamida	6.4
Dimetil asetamida	6.5
N – metilpirolidon	6.7
Dimetilsulfoksida	7.2
Air	10.2

Cara Ekstraksi Lemak

Menurut Hanson dan Robert (1980), cara ekstrasi lemak adalah sebagai berikut :

Prosedur ekstraksi Fosfolipid dari yeast, berdasarkan prinsip awalnya digunakan untuk jaringan hewan, akan bekerja campuran ethanol-diethylether (1) dan khloroform-methanol (2). Sementara metode ini tampak efektif untuk ekstraksi glycerophos- pholipids dari sel sel rusak, secara umum, miskin ekstraksi didapatkan dari seluruh sel (3-5). Lain potensi masalahnya adalah aktifnya kuat phospholipase selama ekstraksi.

Pellet dari sel atau mycelia yang telah dicuci dicatat sebagai ³²Pi,  [³HI] inositol, atau [¹⁴C] kolin yang telah diekstraksi didalam tabung dengan teflon-lined tertutup dan dilakukan dengan berbagai prosedur seperti berikut. ekstrak lipid disatukan dengan residu dihidrolisis yang telah diuji kadar logam ¹⁴C atau ³H dengan spektrometer. Sel yang tidak diekstrak maupun sel yang diekstrak dan residu yang dihidrolisis dengan 6N HCl selama 40 jam pada suhu 105.

Langkah IA, menurut Folch, Lees, dan Sloane Stanley. Sel pellet diekstraksi dengan menggunakan 5 ml kloroform – metanol dengan perbandingan 2:1 (v/v) selama 24 jam. Hasil campuran tersebut disentrifuge dan supernatan dipisahkan. Dilakukan ekstraksi kembali sel pellet lebih dari sekali, dan supernatan dari hasil ekstraksi dicampurkan.

Langkah IB. menurut Pedersen, sel pellet dicuci (langkah sebenarnya sel lyophilized yang digunakan) diekstraksi dengan menggunkan pelarut 5 ml kloroform – methanol dengan perbandingan 1:1 selama 3 jam pada suhu ruang. Hasil campuran tersebut disentrifuge dan supernatan dipisahkan. Dilakukan ekstraksi sel pellet kembali sebanyak dua kali dengan cara yang sama, dan supernatan dari hasil ekstraksi dicampurkan.

  Langkah IC. Menurut Hubbard dan Brody, sel pellet yang bersih diberi perlakuan dengan menambah 5 ml methanol diinkubasi selama 24 jam dan disentrifuge. Kemudian pellet diekstraksi kembali selama 60 menit, kemudian 30 menit lagi dengan ditambah 5 ml kloroform-metanol 2: 1 (v / v). Ketiga ekstrak kemudian dikombinasikan.

Langkah ID.  Menurut Latters. Sel pellet dicuci kemudian diperlakukan dengan  ditambah 5 ml 95% etanol dan diiinkubasi pada suhu kamar selama 20 jam. Campuran disentrifugasi dan supernatan telah dipisahkan. Pelet selanjutnya diekstraksi dua kali dengan 5 ml kloroform-metanol 2: 1 (v / v) pada suhu kamar selama 2 jam. Kemudian Pelet diekstraksi dengan 5 ml asam klorida kloroform – metanol - terkonsentrasi 124: 65: 1 (v / v / v) selama 2 jam lagi pada suhu kamar.  Supernatan dari empat ekstraksi digabungkan.

Langkah  II. Menurut Hanahan dan Jayko. Sel pelet yang telah dicuci diekstraksi dengan 5 ml 95% etanol dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu kamar. Cukup peroksida bebas dietil eter ditambahkan untuk membuat 3 : 1 alkohol-eter campuran. Setelah 24 jam campuran disentrifugasi dan supernatan dipisahkan.

Langkah IIIA. Menurut  Angus dan Lester (10). Sel pellet yang telah dicuci diekstraksi dengan 5 ml 95%  etanol - air – dietileter – piridin - conc. NH₄0H 15 : 15 : 5 : 1 : 0.018 diinkubasi selama 15 menit pada suhu 60°C. Ekstrak tersebut pisahkan setelah disentrifugasi dan sel pelet diekstrak lebih dari dua kali dengan cara yang sama.

Langkah IIIB. Kultur diberi perlakuan selama 1 jam pada suhu 0°C dengan 5% asam trikloroasetat sebelum mencuci sel. Ekstraksi dilakukan seperti yang dijelaskan pada langkah IIIA.

Langkah IIIC. Langkah ini adalah sama dengan IIIB kecuali pada asam trikloroasetat dinetralkan dengan 6N NaOH setelah 1 jam pada suhu 0°C dan diizinkan untuk tetap disuhu 5°C selama 18 jam sebelum mencuci sel.

Langkah IVA. Pelet dicuci dan diekstraksi dengan 5 ml etanol - air 4: l pada suhu 100°C selama 15 menit dan disentrifugasi. Pelet diekstraksi lebih dari dua kali di mode yang identik.

Prosedur IVB. Menurut Latters. Langkah ini  identik untuk Prosedur IVA kecuali bahwa ekstraksi dilakukan  pada 75°C.

Prosedur IVC. Langkah ini identik dengan prosedur IVA kecuali ekstraksi dilakukan pada 50°C.

Prosedur IVD. Langkah ini identik dengan prosedur IVA kecuali pada media kultur diberi perlakukan dengan 5% asam trikloroasetat selama 1 jam pada 0°C sebelum mencuci sel.

Prosedur IVE. kultur diberi perlakukan dengan 5% asam trikloroasetat selama 1 jam pada suhu 0°C sebelum mencuci sel. Sel Pelet diekstraksi dengan 5 ml etanol – air - piridin conc. NH40H 80 : 20 : 2,85 : 0,05 untuk 15 menit pada 100°C. Residu disentrifugasi dan diekstraksi lebih dar dua kali dengan cara yang sama.

Ekstrak lipid inositol ditandai [³H] yang dikromatografi pada 15 x 19 cm potongan EDTA diberi perlakukan silika gel diresapi kertas dalam satu dimensi dengan kloroform – methanol - 4.2N NH₄0H 9: 7: 2 (volume). Ekstrak lipid kolin label [¹⁴C]  diselesaikan pada kertas yang sama dengan kloroform – metanol - conc. NH₄OH 66: 17: 3 (volume). Dalam kedua kasus setiap sample dipotong menjadi 0,5 cm bagian dan ditambahkan ke botol dan dihitung. Telah dijelaskan sebelumnya cara menghitung cairan. Daerah fosfolipid yang dibandingkan dengan standar yang dikenal. Inositol phosphoryl ceramide dan mannosylinositolphosphorylceramide isomer tidak dipisahkan dengan baik dan karena itu dilaporkan sebagai jumlah. Ekstrak lipid berlabel ³²P yang dikromatografikan dalam dua dimensi pada silika gel kertas diresapi EDTA diberi perlakukan seperti yang telah dijelaskan sebelumnya.